Количество вируса гепатита с

Вирусная нагрузка при гепатите С

Современная диагностика гепатитов требует не только выявления причины, но и определения стадии болезни, интенсивности поражения печени. Это необходимо для выбора оптимального варианта лечения, прогноза жизни пациента.

Вирусная нагрузка при гепатите С — один из наиболее информативных способов решения проблемы и ответа на вопросы врача. Он основан на качественном и количественном анализе состава рибонуклеиновых кислот (РНК) вируса в крови больного человека. По полученным показателям можно с достоверностью судить о скорости прогрессирования патологии печени.

Какими методами определяют качественные показатели?

Диагностика вирусного гепатита С проводится по специальным чувствительным тестам. Качественный анализ подтверждает или отрицает наличие вируса в клетках крови больного. Результат дается в форме (+) или (-), «да» или «нет». Указывает на заболевание даже в ранней стадии, но не дает возможности установить интенсивность развития поражения печени, «силу» вируса.

Для проведения достаточно специального экспресс-теста и капли крови. Он позволяет обнаружить антитела к вирусу. Можно приобрести в аптеке. Состоит из комплекта пластиковой полоски, пипетки и игольчатого приспособления для прокола пальца. Кровь забирается пипеткой и помещается в указанный отсек.

Результат получают спустя 10–15 минут. Появление двух полосок говорит «да», одной — «нет». Бывает видно еще одно слабо окрашенное пятно. Его можно расценить, как низкую концентрацию антител.
После получения положительного ответа пациент должен обязательно проходить обследование для точного установления диагноза.

Качественные нарушения в организме при гепатите С подтверждаются клинико-биохимическими исследованиями. О высокой степени поражения печеночных клеток и нарушенных функциях органа говорят следующие результаты:

• рост СОЭ, гемоглобина;
• обнаружение уробилина и билирубина в моче;
• увеличенные в разы трансферазы (аланиновая и аспарагиновая);
• снижение протромбинового индекса и альбуминов;
• рост фруктозо-1-фосфатальдолазы Ф-1-ФА, тимоловой пробы; значительное повышение в сыворотке холестерина, триглицеридов, билирубина.

Подтверждением нарушенных функций печени являются ферменты:

• щелочная фосфатаза;
• сорбитдегидрогеназа;
• лактатдегидрогиназа;
• гаммаглутаминтранспептидаза;
• гаммаглутамилтрансфераза.

Их изучают в биохимических лабораториях поликлиники. Резкое отклонение состава требуют дополнительных количественных анализов на вирусную нагрузку.

Способы количественной оценки вирусной нагрузки

Вирус гепатита С в отличие от других имеет множество штаммов (генотипов). Выделено более 9 разновидностей, кроме того, каждый еще подразделяется на 3–4 подтипа. Это предоставляет вирусу возможность мутировать.

Весь генетический материал заключен в РНК и находится в ядерных структурах клетки микроорганизма. Количественный метод используется при выявленном бесспорном диагнозе, когда необходимо установить форму болезни и стадию воспалительного процесса.

Подсчет производится по числу клеток вируса в 1 мл крови пациента. Чем больше РНК вируса гепатита С, тем выше активность поражения. Это указывает на угрозу прогрессирования болезни, распространения на здоровые клетки печени. Если численность клеток ненамного выше нормы, то результат все равно считается вирусной нагрузкой.

Для определения количества РНК в «больных» клетках применяют иммунологические методы. Они заключаются в выявлении специфических антител или, наоборот, антигенов при воздействии известным реактивом.

В методике иммуноферментного анализа (ИФА) в сыворотку пациента вводят стандартные антитела, меченные ферментами. Если в крови имеются антигенные структуры вируса гепатита С, то комплексы антиген+антитело изменяют цвет красящего вещества. Количественный подсчет основан на пропорциональном соответствии молекул антигена.

Способ иммуноблоттинга — более чувствителен, сочетает ИФА и предварительное разделение плазмы электрофорезом. Позволяет выявить маркеры гепатита С (антитела и иммуноглобулины). Для исследования используют РНК-блоттинг, белок-блоттинг. Время проведения анализа от трех часов до двух суток.

Радиоиммунологический анализ (РИА) — отличается использованием меченых изотопов для количественной оценки компонентов реакции. Последующая радиометрия выдает окончательную цифру. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) — не является иммунологическим. Его значимость трудно переоценить.

Дело в том, что даже при крайне малом содержании специфической генной информации из РНК проводится репликация (копирование) цепи аминокислот, что увеличивает общую массу субстрата. Поэтому исследование генома считается наиболее достоверным. Показывает положительный результат при заражении уже на пятый день, задолго до проявления клинической симптоматики. У здорового человека результат будет отрицательным.

Одна из рекомендаций ВОЗ — троекратное исследование методом ПЦР для выявления РНК вируса гепатита С. Анализ называется «тест 321».

Эксперты сделали вывод, что только троекратное подтверждение вирусной нагрузки не менее 60 МЕ/мл считается достоверным диагностическим признаком даже на фоне отсутствия других маркеров.

Обычно кровь на ПЦР во время гепатита С сдают в первый раз до лечения, затем после первой, четвертой, двенадцатой и двадцать четвертой недели. Исследование после трех месяцев лечения (12 недель) считается показателем эффективности применяемых препаратов.

Метод раздвоенной ДНК(R-DNK). Считается более дешевым, но менее результативным. Подходит для государственных медицинских учреждений. Позволяет проводить исследование сразу больших коллективов людей. Способен выдать негативный результат при наличии вируса. Более рационально этот метод рекомендуется использовать в качестве дополнительного обследования.

Способ транскрипционной амплификации (ТМА). Наиболее простой и дешевый при достаточной эффективности. Подходит для диагностики гепатита С. Критерием патологии и степень заразности больного при R-DNK считается уровень выше 500 ME, при TMA — от 5 до 10 ME.

Значение концентрации вируса

Чем больше содержание вируса в крови человека, тем он опаснее для окружающих своей заразностью. Эффективность лечения зависит от того, как удается снизить количество вируса. Этот критерий учитывается для прогноза выздоровления.

Содержание возбудителя проверяют в динамике. Если удается уменьшить вирусную нагрузку, то медикаменты считаются эффективными, можно переводить больного на поддерживающие дозировки. При отрицательной динамике анализа необходима корректировка дозы или замена препаратов. Общую оценку состояния пациента дает одновременное сопоставление с результатами клинических и биохимических тестов.

Для первого исследования необходим недельный срок. Динамика повторных анализов проводится спустя месяц. При положительном анализе на антитела у людей без симптомов болезни необходимо повторять исследование вирусной нагрузки ежегодно.

Как проводится трактовка результатов исследований?

По итогам выдаются общие качественные результаты (отрицательный или положительный). При выявлении вируса подробно указывается количественное значение с характеристикой степени зараженности.

Расшифровка вирусной нагрузки при гепатите С проводится в международных единицах (МЕ/мл):

• высоким считается показатель — свыше 800 000 МЕ/мл;
• низкой вирусной нагрузкой — меньше 800 000.

Одновременно учитывается в первом случае более 2 млн копий/мл, во втором — менее. При высокой нагрузке говорят об активном воспалительном процессе. В таблице указана более подробная трактовка степени нагрузки.

Наиболее частое значение при первичном исследовании на фоне признаков гепатита — примерно 1 100 000 МЕ/мл. Результат считается положительным. Назначается весь комплекс терапии. Если обнаруживают от 400 000 ME и более, считается что вирус не просто присутствует, но и активно размножается, заражая окружающих. Небольшое снижение — показатель благоприятного прогноза на выздоровление.

Отрицательный результат и эффективное лечение подтверждаются полным отсутствием генного материала РНК вируса гепатита С в крови. Его считают достоверным при повторах с большими перерывами. Увеличение вирусной нагрузки после окончания курса лечения и хороших показателей указывает на вероятность рецидива гепатита.

Если в заключении написано: «РНК ниже диапазона измерений», это значит, что генетический материал вируса имеется, но слишком мал для определения конкретного количества данным методом. Подтвердить анализ или опровергнуть можно только с помощью способа полимеразной цепной реакции.

При выявлении положительного анализа на гепатит С у беременной женщины с повышенной вирусной нагрузкой значительно повышается риск заражения плода от больной матери. Приходится решать вопрос о целесообразности сохранения беременности, поскольку применение лекарственных препаратов для лечения может вызвать тяжелые генные мутации у ребенка.

Вирусная нагрузка при гепатите С

Вирусная нагрузка, или виремия – это количество генетического материала возбудителя в биологическом материале обследуемого человека. В случае с вирусным гепатитом С ген возбудителя представлен РНК (рибонуклеиновой кислотой) вируса, а ищут его в венозной крови. Установить уровень вирусной нагрузки позволяет такой современный лабораторный диагностический метод диагностики как анализ ПЦР (полимеразной цепной реакции). Виремия определяется МЕ (международными единицами) в 1 мл крови или количеством копий РНК в 1 мл крови. Эти показатели можно конвертировать друг в друга: 1 МЕ приблизительно соответствует 4 копиям РНК. Те это показатель количества копий в 1 миллилитре крови пациента, например нагрузка 4,6*10’5 МЕ означает 460000 МЕ или 1,840 млн копий РНК в миллилитре крови.

Когда ищут вирусный антиген?

Вирусный антиген в крови пациента ищут тогда, когда получают положительный результат анализа на антитела к вирусу гепатита С методом иммуноферментного анализа (ИФА). Что значит выявление антител к гепатиту С? Антитела(иммуноглобулины) к вирусу гепатита С могут быть в крови человека либо если он перенес заболевание ранее, либо, если он и сейчас заражен. Выявление вирусного генетического материала позволяет установить причину наличия антител в крови человека.

Виремия влияет на течение и агрессивность заболевания, а также на дальнейший прогноз для здоровья и жизни пациента. Высокие ее цифры указывают на высокую вирусную активность с риском высоких фиброзов в печени, а у беременных – на реальную угрозу внутриутробного заражения плода гепатитом С. Чем выше уровень виремии, тем опаснее болезнь и тем хуже ее прогноз. Низкая вирусная нагрузка и снижение ее в процессе противовирусного лечения является для пациента хорошим прогностическим признаком, высокий же уровень виремии и отсутствие ее снижения в ответ на проводимое лечение – неблагоприятным сигналом. Уровень виремии следует регулярно контролировать во время прохождения курса лечения. Ответная реакция вируса гепатита С является показательной и определяет длительность противовирусной терапии, которая может составлять от 12 до 24 недель.

Для установления РНК возбудителя в крови и определения уровня вирусной нагрузки может использоваться несколько лабораторных методов: ПЦР (самый распространенный), разветвленной ДНК и ТМА.

Метод ПЦР

ПЦР-анализ может обнаружить вирусную РНК гепатита С даже тогда, когда его количество в крови обследуемого человека минимально. Это дорогостоящий вид исследования, поскольку для него необходимы дорогие тест-диагностикумы. Суть метода состоит в том, что с помощью определенного температурного воздействия на пробирку с биоматериалом достигают множественного копирования РНК. Таким способом искусственно увеличивают количество генетического материала вируса в пробе.

В подготовленную таким образом пробу добавляют красящий фермент, который взаимодействует с РНК возбудителя, если таковой в пробе имеется. По плотности окрашивания проводят оценку вирусной нагрузки, сравнивая полученный цвет с цветной шкалой.

С целью обнаружения РНК вируса может проводиться один из трех видов ПЦР:

Качественный. Дает ответ на вопрос, есть ли вирус гепатита С в крови обследуемого. В норме получают ответ: «РНК не обнаружена». Этот тест на обнаружение антигена возбудителя необходим для установления факта заражения гепатитом С.

Количественный. Используют для контроля эффективности противовирусного лечения.

Генотипирование. Применяют для уточнения диагноза – установления генотипа возбудителя.

Количественный анализ ПЦР показывает уровень виремии.

Чувствительность этого теста позволяет обнаружить антиген при его содержании в крови от 50 МЕ/мл, а ультра тест имеет чувствительность от 15 МЕ/мл. В течение всего курса лечения с помощью количественного ПЦР уровень виремии устанавливают несколько раз: до начала лечения (первичный уровень), через 2 недели и при необходимости через 4 недели (в зависимости от длительности курса и вирусологического ответа ), также спустя полгода с начала лечения. Установление вирусной нагрузки после его окончания считается показательным, поскольку подтверждает или отрицает выздоровление пациента.

В отличие от качественного, количественный анализ ПЦР может иметь много вариантов ответа:

«РНК не обнаружено» – такой вариант ответа возможен тогда, когда вируса в крови пациента нет;

«ниже диапазона измерений» – такой ответ лаборатория может выдать, если качественным методом ПЦР следы возбудителя были обнаружены, а чувствительность количественного метода не позволила определить уровень виремии;

при обнаружении вирусной РНК лаборатория выдает результат в МЕ/мл или копиях/мл.

Зачастую цифровые результаты количественного анализа ПЦР выдаются на бланке с таблицей, в первой колонке которой указан искомый генотип возбудителя, во второй – полученный результат, в третьей – норма. Под нормой в каждой лаборатории принимаются диапазоны показателей, установленные производителями тест-систем для проведения анализа.

Метод разветвленной ДНК (гибридизационного анализа)

Это устаревший метод, основным преимуществом которого является быстрота проведения и возможность одновременного проведения обследования нескольких пациентов. Минимальное количество РНК вируса в крови с его помощью обнаружить не удастся, поскольку он имеет низкую чувствительность – не менее 500 МЕ/мл. Используют метод разветвленной ДНК только для документального подтверждения наличия возбудителя в крови, когда этот факт уже установлен.

Суть метода заключается в использовании двух нуклеотидных зондов. Первый из них одним концом связывается с вирусной РНК, а другим фиксируется искусственно созданной молекулой-усилителем. Эту молекулу называют разветвленной ДНК. После процесса гибридизации с РНК вируса в среду вносят второй зонд, который подходит по структуре к молекуле-усилителю. Он помечен специальным красящим веществом. Таким способом усиливают сигнал, издаваемый нуклеотидом вируса, и улавливают его с помощью химический люминесценции.

Метод транскрипционной амплификации (ТМА)

Это самый высокочувствительный лабораторный метод определения и подсчета количества вирусного генома в крови. С помощью этого анализа можно обнаружить даже незначительное количество возбудителя в крови – 5-10 МЕ/мл. В настоящее время в российских лабораториях метод недостаточно распространен.

Вирусная нагрузка при гепатите С: расшифровка

Расшифровкой результатов количественных анализов ПЦР занимается лечащий врач. В научной медицинской литературе встречается расшифровка анализа в виде такой таблицы:

Референсные показатели, МЕ/мл

Уровень вирусной нагрузки

Вирус не определяется (отсутствует) или его количество ниже порога чувствительности теста

до 400 тысяч низкая нагрузка

400-800 тысяч средняя нагрузка

Требуется назначение стандартной схемы лечения или продолжение курса

свыше 800 тысяч высокая нагрузка

Очень большая вероятность развития осложнений гепатита (фиброза, цирроза)

Кроме непосредственного установления уровня виремии, для расшифровки результатов анализа очень важна ее динамика во времени: если в течение курса наблюдается положительная динамика уровня вирусной нагрузки, то есть она имеет тенденцию к уменьшению, это расценивается, как хороший вирусологический ответ на терапию; например, если БВО ( быстрый ответ не получен через 2 недели) после начала приёма препаратов и вирус ещё обнаруживается в крови при сдачи качественного анализа ПЦР, но наблюдается снижение вирусной нагрузки в 100 крат и более , через 1-2 недели терапии это можно считать благоприятным сигналом к продолжению лечения если проводимая терапия не оказывает влияния на уровень виремии или на фоне лечения наблюдается отрицательная ее динамика, то есть количество возбудителя в крови увеличивается, стоит задуматься о резистентности (устойчивости) возбудителя к используемой схеме лечения; если на фоне лечения резко увеличился уровень вирусной нагрузки, говорят о «вирусном прорыве». Такой результат анализа является крайне неблагоприятным и указывает на значительное ухудшение состояния больного.

При обнаружении в анализе ПЦР «вирусного прорыва» или отрицательной динамики виремии врачу необходимо быстро принимать решение, как снизить вирусную нагрузку у пациента. В зависимости от генотипа возбудителя к стандартной безинтерфероновой схеме лечения добавляют дополнительные препараты («Рибавирин», «Пегинтерферон»). Отзывы людей о вирусной нагрузке при гепатите С Большое количество пациентов, болеющих хроническим вирусным гепатитом С, сами умеют толковать цифры, полученные после анализа ПЦР. Существует много интернет-сообществ и специализированных форумов, на которых пациенты обмениваются результатами анализов, отзывами об эффективности лечения. Однако каждому больному гепатитом С необходимо помнить, что одинаковых случаев не бывает и использовать отзывы других пациентов как руководство к действию нельзя. Одних результатов теста на вирусную нагрузку недостаточно для оценки состояния больного: здесь нужна полная клиническая картина, результаты других лабораторных и инструментальных методов исследования, данные о проводимой противовирусной терапии и т.д.

Анализ ПЦР гепатита С (РНК гепатита С)

ПЦР анализ

Качественный анализ указывает на наличие вируса в крови. Данный тест необходимо проводить всем пациентам, у кого обнаружены антитела к гепатиту С. Его результат может быть «обнаружено» или «не обнаружено». Референсные значения (значение, которое должно быть в норме) — «не обнаружено». Результат «обнаружено» может свидетельствовать о том, что вирус размножается и инфицирует все новые клетки печени. Качественный тест ПЦР имеет определенную чувствительность (10-500 МЕ/мл.). Это означает то, если вирус присутствует в крови в очень малой концентрации (ниже порога чувствительности метода), может быть получен результат «не обнаружено». Поэтому, при проведении качественного ПЦР у пациентов с низкой виремией (концентрацией вируса), например, проходящих противовирусную терапию, важно знать чувствительность диагностической системы. Для контроля вирусологического ответа при проведении противовирусной терапии желательно использовать диагностическую систему с чувствительностью не ниже 50 МЕ/мл. Таким критериям соответствуют, например, анализаторы COBAS AMPLICOR ВГС-TEST (аналитическая чувствительность 50 МЕ/мл или 100 копий/мл), РеалБест РНК ВГС (аналитическая чувствительность 15 МЕ/мл или 38 копий/мл) и другие.

Где безопасно купить новые препараты для лечения гепатита C? На наш взгляд, самый оптимальный и надёжный способ – это воспользоваться услугами проверенных годами поставщиков на нашем форуме, которые уже помогли избавиться от этого заболевания сотням пациентов.

Стоимость пцр

ПЦР анализ, стоимость которого зависит от применяемых реактивов, и может составлять от 300 руб. до 5000 руб., выполняется от одних суток до недели.

Кроме метода ПЦР для выявления РНК ВГС также используется метод транскрипционной амплификации (ТМА), обладающий лучшей чувствительностью (порядка 5-10 МЕ/мл.), однако этот метод в России пока не распространен.

Как часто нужно делать ПЦР гепатита C? Обычно его проводят сразу после обнаружения антител к гепатиту C и после 4-й, 12-й, 24-й недели противовирусной терапии, а также через 24 недели после завершения ПВТ, а затем — ежегодно, в случае УВО.

Рис. 1. Пример результатов качественного ПЦР гепатита С.

Количественный анализ ПЦР (вирусная нагрузка) — это тест на концентрацию вируса (виремию) в крови. Вирусная нагрузка — это количество единиц генетического материала (вирусной РНК), которая присутствует в определенном объеме крови (обычно это 1 мл, что соответствует 1 кубическому сантиметру). Это количество выражается в цифрах, единицы измерения МЕ/мл (международные единицы на миллилитр). Количество вируса может быть отображено по-разному. Например, 1,5 млн МЕ/мл, что соответствует 1.500.000 МЕ/мл или 1.5* 10 6 МЕ/мл. В некоторых лабораториях используются другие единицы измерения — копии/мл. Коэффициент пересчета из копий в международные единицы различный для разных тест-систем. Примерно значения можно пересчитать по формуле 1 МЕ/мл = 4 копии/мл, например, 5.5* 10 5 МЕ/мл = 2.2* 10 6 копий/мл.

На что же влияет вирусная нагрузка?

Во-первых, на инфекционность. Чем выше концентрация вируса, тем выше риск передать вирус, например, при половых контактах или вертикальным путем. Во-вторых, концентрация вируса влияет на эффективность лечения (если лечение будет проводиться на основе интерферона). Так, низкая вирусная нагрузка является благоприятным фактором при проведении терапии, а очень высокая – неблагоприятным. Также, количественный ПЦР имеет большое значение при проведении интерфероновой терапии для оценки ее успешности и планировании длительности курса. Так, при быстром ответе на лечение и низкой виремии перед терапией, сроки лечения могут быть сокращены. И, наоборот, при медленном снижении концентрации вируса, ПВТ может быть продлена.

Какая нагрузка считается низкой, а какая — высокой?

Высокой принято считать нагрузку свыше 800 *10 3 или 800.000 ME/мл, что примерно составляет 300*10 4 или 3.000.000 копий /мл. Нагрузка свыше 1*10 7 ME/мл считается очень высокой. Однако до сих пор среди специалистов нет общего мнения о значениях, разграничивающих высокую и низкую виремию. Так, в некоторых работах этой границей считается цифра 400.000 ME/мл.

Как часто нужно делать количественный тест?

Обычно его делают перед проведением терапии и после 12-й недели лечения для оценки ее эффективности в случае, если качественным тестом РНК еще определяется.

Результатом количественного теста может быть количественная оценка виремии в формате, описанном выше, а также результаты «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено».

Порог чувствительности количественного ПЦР обычно выше, чем качественного. Так, для системы COBAS AMPLICOR он составляет 600 ME/мл. Результат «не обнаружено» может означать, что количественный тест и подтверждающий качественный тест не обнаружил вирусную РНК. Результат «ниже диапазона измерений» означает, что количественный тест не выявил РНК гепатита С, но вирус присутствует в очень малой концентрации (в случае, если при этом был проведен дополнительный подтверждающий качественный тест).

Рис.2 Пример результатов количественного теста.